單細胞轉錄組測序（scRNA-seq）技術作為一項革命性的生物學工具，讓人們更直觀的認識到不同的細胞亞群和狀態(tài)。但由于凍存組織無法制備高質量的細胞懸液以及細胞形狀不規(guī)則，細胞體積較大的無法直接通過scRNA測序來分析。
這時，單細胞水平上的核轉錄組測序（snRNA-seq）應運而生，帶來了一種新的解決方案。單細胞核轉錄組測序就是把組織抽核，制備成單細胞核懸液進行核轉錄組測序。大大減少了處理的難度，加速了人類對疾病發(fā)生發(fā)展探索的步伐。
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強強聯合，助力單細胞核測序時代
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實驗步驟
1) 將新鮮冷凍的人腦組織進行解離并過濾制成核懸液。
2) 使用單細胞柔性分選系統Pala 進行核分選后，進行計數和成像以確定細胞數量和碎片清除效率。
3) 計數后的核稀釋至300,000個/ml , 每次添加600μl懸液至Pala細胞芯片中，進行大量細胞分選模式。分析并根據FSC（前向散射）/ALL（軸向光損失）和FSC/PI圖表對核進行門控，以去除雙聯體和碎片。
4) 加載到10X Genomics進行文庫制備和測序
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實驗結果
1) 對比來自解離的大腦核圖像發(fā)現，經過單細胞柔性分選系統Pala后的組織成功清除了碎片。
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2) Pala與標準的統計數據對比，發(fā)現經過Pala分選后的細胞數量更多，每個細胞的平均讀數更低，每個的總讀數更多，測序飽和度更低。
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3) 從結果圖中看到，標準主要由少突膠質細胞主導，而Pala測序顯示出更多的集群和更均勻的細胞類型分布。
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相較于傳統核準備方法，單細胞柔性分選系統Pala提供了以下優(yōu)勢：
輕柔分選
＜2si 的鞘液壓力，減少了對細胞的物理損傷，特別是脆弱的細胞類型，如神經細胞。
去除細胞聚集體和碎片
Pala能夠有效去除細胞聚集體和大小不一的碎片，這對于提高后續(xù)測序步驟中獲得高質量數據至關重要。
高細胞恢復率
Pala分選的比標準多產生了10%的細胞，這表明Pala在分選過程中能夠更有效地恢復細胞。
簡化操作流程
Pala的設置和操作相對簡單，使得用戶能夠快速上手并進行實驗，減少了因操作復雜性帶來的技術障礙。
減少實驗時間和成本
與傳統的FACS相比，Pala的簡化流程和較低的運行成本
適用于多種類型
適用于多種類型的細胞和核，包括那些難以通過傳統方法分離的細胞類型。
靈活分選
提供三種分選模式，包括單細胞分選，稀有細胞富集，大量細胞分選
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總的來說，單細胞柔性分選平臺Pala 和 10X Genomics強強聯合，為單細胞RNA測序提供了一個高質量、高效率的準備方案。
更多詳情：https://www.chem17.com/tech_news/detail/3704206.html
